中国马铃薯

2005, (04) 204-207

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嵌套式PCR超灵敏检测马铃薯环腐病菌
Nested PCR for Ultrasensitive Detection of the Potato Ring Rot Bacterium

何云霞,白艳菊,胡林双,于德才,马纪

摘要(Abstract):

马铃薯种薯中存在环腐病菌潜伏侵染,这种潜伏侵染逐代累积、逐渐表现症状,这是马铃薯环腐病无法根除的根本原因。本研究应用国外成功报道的根据存在于pCS1质粒和环腐菌染色体中一个1.3 kb的插入因子IS1121、高度重复的DNA片段设计的环腐病菌亚种特异性引物序列合成出引物对CMSIF1-CMSIR1和引物对CMSIF2-CMSIR2。以环腐标准菌株、黑龙江省环腐菌株以及马铃薯上其它主要的细菌病原菌(青枯病、软腐病、黑胫病)为试验材料进行直接PCR和嵌套式PCR扩增,结果只有环腐标准菌株和黑龙江省环腐菌株出现特异性片段(直接PCR扩增出1046 bp的片段,嵌套式PCR扩增出864 bp的片段)。将环腐菌纯菌种菌悬液稀释成浓度梯度并与马铃薯组织液混合进行直接PCR和嵌套式PCR检测灵敏度比较,结果表明嵌套式PCR检测灵敏度比直接PCR检测灵敏度提高了100 ̄1000倍。以明显感病症状的块茎、无明显感病症状的块茎和健康块茎为试验材料进行直接PCR和嵌套式PCR,结果除明显感病症状块茎外,所有无明显感病症状的块茎也均被检测出带有环腐病菌。

关键词(KeyWords): 马铃薯环腐病菌;分子检测;嵌套式PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家科技部重点基础研究发展规划(973)资助项目(2001CCC02900)

作者(Author): 何云霞,白艳菊,胡林双,于德才,马纪

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